Parauga sagatavošana:
Paraugu savākšana: savāc tādus paraugus, piemēram, asinis, audus, siekalas un urīnu, atbilstoši eksperimenta mērķim.
DNS ekstrakcija: izmantojiet īpašu DNS ekstrakcijas komplektu, lai no parauga iegūtu DNS.
PCR reakcijas sagatavošana:
Projektēšanas gruntējumi: dizaina specifiski gruntēšanas pāri, pamatojoties uz mērķa secību veidņu DNS pastiprināšanai.
Sagatavojiet reakcijas maisījumu: ieskaitot veidnes DNS, gruntējumus, buferi, DNS polimerāzi, DNTPS (dezoksinukleosīdu trifosfātus), mg 2+ utt.
SET PCR programma:
PCR instrumentu iestatījumi: ievadiet iepriekš iestatīto PCR cikla parametrus, piemēram, 95 grādu uzkarsēšanas temperatūru, denaturācijas temperatūru (piemēram, 95 grādi), atkvēlināšanas temperatūru (piemēram, 55 grādi), pagarinājuma temperatūru (piemēram, 72 grādi) un ciklu skaitu.
PCR reakcija:
Pievienojiet paraugu: Pievienojiet reakcijas maisījumu PCR reakcijas tvertnei vai mikroshēmai, un katram paraugam parasti ir viena reakcijas aka.
Veiciet PCR: PCR instrumentu cikli saskaņā ar iepriekš iestatīto programmu, ieskaitot apkuri, dzesēšanu, atkvēlināšanu un pagarināšanas pakāpes.
Produktu analīze:
Atdzesēšana pēc pastiprināšanas: Pēc PCR pabeigšanas paraugs īsi atdzesē 4 grādos.
Elektroforētiskā atdalīšana: izmantojiet gēla elektroforēzes tehnoloģiju, piemēram, agarozes gēla elektroforēzi, lai atdalītu dažādu garumu PCR produktus.
Fluorescences skenēšana: fluorescējoši marķētie grunti izstaro specifiska viļņa garuma gaismu pastiprinātā izstrādājumā, un PCR instruments nolasa šos signālus un reģistrē tos.
Datu apstrāde un interpretācija:
Datu analīzes programmatūra: izmantojiet specializētu programmatūru, lai analizētu fluorescējošo signālu un aprēķinātu mērķa fragmenta koncentrāciju vai relatīvo koncentrāciju.
Rezultāta interpretācija: Balstoties uz PCR līkni un bāzes līniju, nosakiet, vai PCR ir veiksmīga, vai mērķa fragments pastāv un cik tas ir.
Rezultātu ierakstīšana un saglabāšana:
Reģistrējiet rezultātus eksperimentālajā ziņojumā un pareizi saglabāt sākotnējos datus un paraugus.